SDS – PAGE je postup vedci používajú na oddelenie proteínov na základe toho , ako sa preniesť cez gél . Gély sú vyrobené z polyméru s názvom polyakrylamid . Keď urobíte polyakrylamidovom gélu , začnete so zmesou chemikálií : akrylamidu , bisakrylamid , SDS a vyrovnávacie chemikálie pre stabilizáciu pH . Pridanie persíranový zlúčeniny a ďalšie chemické látky nazývané TEMED spôsobí akrylamidu za vzniku dlhých reťazcov alebo polymerizácii . Začatie
persulfate iónov v peroxodisíranu amónneho je ekvivalent dvoch síranových iónov spojených slabú väzbu kyslík – kyslík . Táto väzba môže štiepiť alebo zlomiť na dve , čím sa získa sulfátové zvyšky — vysoko reaktívne molekuly s nepárový elektrón . Síran radikál môže reagovať s vodou pre vytvorenie hydroxy – skupinu , alebo môže reagovať s monomérom akrylamidu spustiť polymerizačnej reakcie . TEMED pôsobí ako katalyzátor , ktorý urýchľuje rýchlosť , pri ktorej Persulfate ióny tvoria radikály .
Chain Reaction
raz hydroxyl alebo síranom radikál je tvorený , to napadne akrylamidu monomér , pričom jeden z elektrónov v dvojitej väzby . Akrylamid monomér je teraz zvyšok s nepárový elektrón , tak sa pokračuje k prieniku na iný monomér akrylamidu podobným spôsobom . Táto séria akcií sa vytvoria rýchlo rastúce reťazec akrylamidu monomérov spojených jednoduchými väzbami . Reťazová reakcia skončí iba vtedy , keď dva radikály reagujú so sebou .
Cross – Linking
Ak akrylamidu boli prítomné na jeho vlastné , to by sa netvorí hustý gél , čo potrebujete pre SDS – PAGE . Polyméry musia byť cross – spojené za vzniku gélu s príslušnými vlastnosťami , a to je miesto , kde bisakrylamid vypovedaciu dvojitých väzieb v bisakrylamid tiež slúžiť ako cieľ pre radikály v reakcii , a preto , že má dve miesta , kde môžu byť zaútočil radikály , je to nakoniec začlenená do dvoch rastúcich polymérov . V dôsledku toho , že polyméry skončiť s priečnych väzieb medzi nimi na náhodných miestach po dĺžke každého reťazca .
Úvahy
polymerizačnej reakcie je veľmi rýchla , takže akonáhle vás “ som pridal TEMED a peroxysíranov , sa bude konať veľmi rýchlo . Čistota vašich činidiel je dôležité , pretože nečistoty môžu ovplyvniť vaše výsledky . Kyselina akrylová , napríklad, môžu byť pridané do polyméru a tvorí iónov stránky , ktoré by mohli spôsobiť miestne zmeny pH na svojom gélu . Výsledný gél sa môže ešte obsahovať určité akrylamidu monomér , a akrylamid je neurotoxín , takže vždy prijať vhodné bezpečnostné opatrenia pri práci s SDS gélmi .