Gél filtračné kolóny sa používajú na oddelenie proteínov z komplexných zmesí. Vzhľadom k tomu , každý proteín má unikátnu molekulovú hmotnosť , môžu byť indukované k separácii do rôznych vrstiev migráciu je cez filtračný kolónu obsahujúce rovnomerné gélovú matricu . Ak chcete správne identifikovať každý proteín , ktorý je oddelený von , budete musieť kalibrovať stĺpca pomocou niekoľkých proteínov známych molekulárnych weight.Things budete potrebovať
karboanhydrázy
cytochróm c
Aprotinín
Bazálna soľ
Centrifugujte
feritínu
Odstredivka
napipetuje čerpacie
250 ml odmerné valce
Buffer kvapalina
Scientific čistiace obrúsky klipart injekčnej striekačky
Zobraziť ďalšie inštrukcie
1
Odstráňte fľaštičky karboanhydrázy , cytochrómu C a aprotinín z chladničky alebo mrazničky a umožní im dosiahnuť izbovú teplotu . Pridajú sa 4 mg každého proteínu do centrifugačnej skúmavky na mililiter gélu na filtračnú kolónu . Pridajte 961 MCL bazálnej soli na miligram proteínu do každej centrifugačnej skúmavky , aby sa rozpustili proteíny . Pridať 39,2 MCL feritínu na mililiter gélu do každej skúmavky a premiešajte v odstredivke .
2
Vypnite filtráciu stĺpca čerpadlo a zatvorte kohút na vstupe do kolóny . Povoľte , ale neodstraňujte , v hornej časti filtračnej kolónu . Nastavte čerpadlo maximálneho prietoku pre stĺpce a znovu spustiť čerpadlo , kým sa vyrovnávacia materiál bol vypracovaný off . Zastavte čerpadlo .
3
Pridá sa 1 ml každého proteínu filtračné kolóny pomocou pipety čerpadla . Kvapkanie proteínov sa stanoví vnútorný stĺpca z výšky 1 cm až 2 cm , práce okolo vnútorného okraja stĺpca . Nechajte zmes proteínov usadiť v hornej časti gélovej matrix .
4
Umiestnite vypúšťacej hadice čerpadla do čistej , suchej 250 ml odmerné valce . Reštartovanie čerpadlá rýchlosťou 0,30 ml za minútu a spustiť proteínov do gélovej matrice . Aj keď je čerpadlo v chode , dôkladne po stranách trubice pomocou pipety čerpadlá a malé množstvo pufra kvapaliny . Akonáhle proteíny úplne vstúpil do gélovej matrice , znížiť rýchlosť čerpadla na 0,02 ml za minútu a čerpadlo v 5 cm až 7 cm vrstvou pufra kvapaliny v hornej časti matrice .
5
odpojiť stĺpec čiapka z kohútika . Vyčistite kryt stĺpika a vnútri kolóny vedecké čistiace obrúsky . Znova nainštalujte kryt stĺpika . Naplňte vyrovnávacia nádrž s vyrovnávacím kvapalinou . Pripojte injekčnej striekačky do kohútom a otvorte ho . Použite odsávačku malé množstvo pamäte pomocou hadičky a do striekačky . Zatvorte kohút a znova ju do stĺpca hore . Otvorte kohútik a skontrolujte tesnosť .
6
Spustite stĺp na 0,02 ml za minútu po dobu niekoľkých dní , kým feritínu kapela sa blíži koniec kolóny . Zhromažďovať všetky filtračné gél , ktorý je čerpaná v odmernom valci .