Glutatión alebo GSH je proteín nájdený v oboch rastlín a živočíchov . Pracuje na pomoc enzýmových reakcií v detoxikácii látok znečisťujúcich životné prostredie . Okrem toho , že umožňuje prepravu aminokyselín v bunkách a pomáha udržiavať redukčných reakcií sulfhydryl proteínov . Protokoly GSH testu pomocou GSH nárazníky , normy , substrát , enzýmy a činidlá . V nadväznosti na konkrétny postup je relevantný pre výsledok testu . Enzymatická Recyklácia Metóda
enzymatická metóda recyklácie , pre GSH , používa glutatión reduktázy kvantifikovať GSH . Tento protokol je špeciálne určený pre plazme , tkanivách alebo kultivovaných bunkových vzoriek . Pridať činidlá DTNB ( kyselina 5 – 5′ – dithio – bis – 2 – nitrobenzoová ) na GSH . Skupina sulfhydryl v GSH reaguje s činidlom , a produkuje žltý kyseliny s názvom 5 – tio – 2 – nitrobenzoová kyseliny ( TNB ) . Pridať glutatión reduktázy na kyseliny a GSH zmesi recyklovať GSH a produkujú viac kyseliny . V tomto postupe je rýchlosť produkcie kyseliny je úmerná reakciu recyklácia GSH ; preto , meria sa absorbancia kyseliny TNB za použitia spektrofotometra . Absorbancie poskytuje odhad skutočného množstva GSH vo vzorke .
Pečeňových buniek Glutathion test
Tento protokol analyzuje množstvo GSH do ľudského hepatocelulárneho karcinómu ( rakoviny pečene ) bunky . Ak chcete vykonať tento postup , pomocou kolorimetrické metódy pre GSH odhodlanie znižovať a oxidácii GSH . Znížte GSH pomocou 5 – 5 – dithiobis ( kyselina 2 – nitrobenzoová alebo DTNB ) tvorí
farebný produkt kyseliny 2 – nitro- 5 – thiobenzoové a oxidované glutatiónu ( GSSG ) . Pomocou glutatión reduktázy redukovať za vzniku oxidovaného glutatiónu GSH znova . Za účelom merania množstva GSH v pečeňových bunkách , prečítajte si vzorku na 415 absorbancie kineticky na čítačke mikrotitračných doštičiek .
Apoptózu
V tejto protokol , GSH sa používa na detekciu buniek apoptózu ( smrť ) prostredníctvom merania poklesu zníženú GSH . Pokles koncentrácie bunkovej GSH je ukazovateľom bunkovej smrti . Škvrny ukážkovej bunky s non – fluorescenčné thiolite zelene . Thiolite zelený sa hromadí v cytosolu ( bunky v plazme ) a mitochondrie ( elektráreň ) bunky . Pomocou prietokového cytometra na 490 /520 nm predstaviť množstvo GSH v bunkách .
Celková koncentrácia GSH v živočíšnych a rastlinných vzoriek
Zmerajte koncentráciu celkom GSH ako redukované a oxidované forme v rôznych živočíšnych a rastlinných vzoriek . Pridajte všeobecný tiolové činidlo , 5 – 5′ – dithiobis [ 2 – nitrobenzoová kyseliny ] . Tiol činidlo reaguje s GSH za vzniku 412 nm chromofor , kyselina 5 – thionitrobenzoic ( TNB ) a GS – TNB . Pridať glutatión reduktázy a beta – nikotinamidadenindinukleotidfosfát ( NADPH ) znížiť GS – TNB . Glutatión tiež uvoľní druhý TMB molekulu a recyklovať GSH . Okrem toho , každý oxiduje GSH ( GSSG ) , prítomný v zmesi fromed z disulfidové reakcie sa taktiež zníži na GSH . Použite readeru pri 405 nm čítať úroveň absorbanciu a uviesť celkovú koncentráciu GSH .