Western blot , analytické technike určiť špecifický proteín v danej vzorke , využíva schopnosť enzýmu alebo fluorescenčne značenej primárnej protilátky viazať sa svojím špecifickým antigénom . Jedná sa o trojstupňový proces začínajúcich gélu , nasledované membrány blot a sondovania pomocou protilátok . Detekcia proteín môže byť priame alebo nepriame , pričom posledne pomocou značenej sekundárnej protilátky namierené proti primárnej . Aj keď prijal ako rutinné analýzy proteínov technikou , western blot má svoje obmedzenia , rovnako ako výhody . Výhoda : Citlivosť
Jeden z najväčších argumentov v prospech Western blot , je jeho citlivosť . Vzhľadom k svojej schopnosti detekovať za púhych 0,1 ng proteínu vo vzorke , môže technika teoreticky slúžiť ako efektívny skoré diagnostický nástroj, snímanie sebemenší imunogénna odpoveď od vírusov alebo baktérií vo vzorke pacienta . Nepriame western blot ďalej nadväzuje na tejto citlivosti od schopnosti sekundárna protilátka na zosilnenie intenzity signálu detekovaného pomocou zobrazovacieho systému . Väčšiu citlivosť znamená , že je potreba menej protilátky pre testovanie , ktorý znižuje náklady na laboratórne výrazne
Výhoda :. Špecifiká
western blot Technika vďačí za svoju špecifickosť na dve veľké prispievania faktory . Po prvé , gélová elektroforéza triedi vzorku do proteínov o rôzne veľkosti, náboja a konformáciu . Tento proces sám o sebe je obrovský krok k detekcii , ako pásy vytvorené v géle už získa stopy o veľkosti proteínu alebo polypeptidu . Špecifickosť interakcie protilátka – antigén slúži ako druhý veľký faktor . Pretože špecifické protilátky ukázať afinitu pre špecifické proteíny , môže tento proces selektívne detekovať cieľový proteín aj v zmesi 300000 rôznych proteínov
nevýhodu :. Náchylné k falošných alebo subjektívnych výsledkov
V zášti jeho citlivosti a presnosti , western blot môže ešte spôsobiť chybné výsledky . A falošne pozitívne výsledky , keď protilátka reaguje s non -určené bielkovín, čo je to , čo často sa stane, keď pacient testovaný na HIV sa stane, že tuberkulóza alebo niekoľko parazitárnych infekcií . Falošne negatívny , na druhej strane, môže ľahko dôjsť k väčšej proteíny , ktoré nie sú k dispozícii dostatok času , aby správne prenosu na membránu . Nesprávne blotting a spracovanie často produkujú nakrivo , vyblednuté , alebo dokonca viac kapiel , takže výsledky testov závisí od výkladu technika
nevýhodu :. Vysoká cena a technické dopytu
Náklady na western blot je zložený z veľkých individuálnych výdavkov na značených protilátok , kvalifikovaných analytikov a laboratórne vybavenie . Delikátna proces , western blotting vyžaduje presnosť v každom kroku na riadnu identifikáciu zložiek vzorky je . Menšie chyba v reagenčná koncentrácie alebo inkubačnej dobe môže byť katastrofálne pre celý proces . Konečne , zariadenia potrebné pre detekciu a zobrazovanie – chemiluminiscenčná , Žiarivka , rádioaktívne alebo systémy detekcie laserových – môže byť príliš drahé pre priemerného mikrobiológie jednotky
.