Pri vytváraní väzby nukleových kyselín alebo proteínov , high – spojovací materiál nazvaný PVDF ( polyvinyl difluoride ) membrána poskytuje podporu pre protilátok . Prostredníctvom Western blotting , membrány sú naskladané dohromady , pripravené pre protilátky a potom sa vysuší . Protokol pre sušenie membránu vyžaduje znalosti o tom , ako membrány fungujú , katódové dosky , anóda dosky a aplikácie metanolu riešenie . So správnym protokolom , membrána bezpečne viaže sa na špecifickou protilátkou a je pripravený na okamžité použitie alebo skladovanie . Príprava membrány
Príprava na PVDF membránu čistí a stabilizuje membrány pred prevodom . Pred sušením , membrána je “ blokovaný “ , aby sa zabránilo viazanie od nič iné , než zvláštne nukleových kyselín , ako je napríklad nešpecifické protilátky . Pri tomto postupe mokrej membránu , ktorým ho na rovný povrch pokrytý v metanole . Membrána mení farbu počas tejto vety , z nepriehľadnej na polopriehľadné . Po dokončení sa metanol , membrána je umiestnená v deionizovanej vode máčať po dobu približne dvoch minút . Membrána potom musí namočiť znovu do roztoku metanolu , ktorý je veľmi kyslá .
ClipArt zhromaždenie membrány pred prenosom
Dvaja z membránových papiere sú namočené v prvom roztoku metanolu a umiestni na anódovou doskou . Počas tohto procesu , je potrebné starostlivo skontrolovať pasce bublín , ktoré by mohli ohroziť prenos . Ďalší kus filtračného papiera sa namočí v druhom roztoku metanolu a umiestnené v hornej časti zásobníka . Gél potom pokračuje v hornej časti membrány , s nezoškrípli vzduchové bubliny medzi aplikáciou gélu a membránou . Tri nové kúsky papiera sa potom namočí do katódového pufra a umiestnené v hornej časti gélu . Ak sa vyskytne vzduch bublanie , skúmavka sa snaží vyhladiť membrány .
Prevod
V tejto časti procesu , pripojenie vysokého napätia káble na napájanie a uplatňujú konštantný prúd do gélu oblasti na membráne po dobu 30 minút . Doba prenosu sa bude líšiť v závislosti od typu protilátky . Po 30 minútach , môžete odstrániť napájanie a prenosu membránu . V pravom dolnom rohu membrány je potom rez skontrolovať orientáciu . Prvé dve vrstvy filtračného papiera , sú vyradené , vrátane gélu . Kapely z molekulovej hmotnosti sú označené guličkovým perom .
Sušenie
Akonáhle je prenos dokončený , môžete sušiť membránu v jednom z dvoch spôsobov . Pre rýchlejšie sušenie , membrána sa namočí do 100 percent metanolu po dobu 10 sekúnd , aby sa odstránil vodu . Membrána potom spočíva na kus papierového uteráku po dobu 15 minút . Pre pomalší metódy sušenia , membrána sa umiestni na papierový uterák bez pridania metanolu . Po usušení môže byť membrána používaných alebo skladovaných v suchej nádoby na 4 stupňov Celzia pre budúce použitie .