Biológia je výzvou pre mnoho dôvodov . Jedným z týchto dôvodov je ťažké pri štúdiu makromolekúl — molekuly , ktoré obsahujú stovky či tisíce malých molekulárnych jednotiek zviazané dohromady . Ak je iba jeden alebo dva z týchto menších molekulárnych jednotiek sú odložené , makromolekuly mení svoje vlastnosti . Biológovia je potrebné nejakým spôsobom merať veľmi malé zmeny vo veľmi veľké molekuly . Samozrejme , že “ veľký “ neznamená , že dostatočne zvládnuť a vidieť veľký, aby sa biológovia potrebujú špeciálne nástroje , aby sa takéto merania . Blotting je jeden z týchto nástrojov . Gélová elektroforéza
Všetky písacie techniky začínajú gélovej elektroforézy . Gél je viac alebo menej ako tenký obdĺžnik želatíny . Malé množstvo špeciálne pripravených biologických molekúl je kladený na gélu na jednom konci , potom elektrické pole je aplikované z jedného konca na druhý . Pripravené molekuly sú elektricky nabité , takže elektrické pole je tiahne cez gél . Pohybujú sa pomaly cez hustý gél , kým poľa je vypnutý . Ľahšie molekuly si vytiahol rýchlejšie a pohybovať sa ďalej ťažšie molekuly trvať dlhšie , než sa pohybovať tak , že nerobia to tak ďaleko .
Použitie Gély
v praxi , niekoľko rôznych vzoriek sa odložil šíri pozdĺž jedného okraja gélu . Potom, čo sa aplikuje elektrické pole , rôzne vzorky rozprestreté mieria opačným okraja gélu . Šírenie každej vzorky sa nazýva “ dráha . “ Dráha bude zvyčajne mať niekoľko rôznych pásiem zodpovedajúce molekuly s rôznymi hmotnosťami v každej vzorke . Existuje niekoľko rôznych spôsobov , ako robiť kapely viditeľné . Analýza gél dáva biológovia predstavu o veľkosti jednotlivých molekúl , ale získať viac informácií, je potreba iný spôsob . To je miesto , kde prichádza v blotting .
Blotting
Odsávacie je spôsobom, ako vziať molekuly, ktoré sa šíri od seba v géle a ich sprístupnenie viac analýza . Rovnakým spôsobom , pijavý papier pohltí uvoľnený atrament — alebo bolo v časoch, keď ľudia používajú plniace perá — biologický blotting “ pohltí “ molekuly z gélu do iného materiálu . Molekuly končí v rovnakom vzore , ale teraz vo zvláštnom papiera alebo plastovej fólie . Molekuly si viazaný na liste tak , aby sa nemohli posunúť viac, a potom môžu byť namočený do roztoku ďalších molekúl sondy , ktoré poskytujú ďalšie informácie o molekulách . Existuje niekoľko rôznych spôsobov , ako robiť tieto kroky , ale princíp je rovnaký pre všetky z nich .
Južnej , severnej a západnej blotting
Biológ Edwin Southern bol prvý vyvinúť techniku blot . On vyvinul všetky potrebné informácie , aby si byť istí , že gélová elektroforéza DNA by mohla byť presne prenesené a meria v savý materiál . Táto metóda bola pomenovaná po ňom : Southern blotting . Iní vedci prišiel na to , ako urobiť rovnakú základné techniky práce pre RNA a — v typickom zábavu milujúci vedec štýle — volal ich podrobné metódy Northern blotting . Neskôr , postup bol upravený pre meranie proteínov , a bol nazývaný westernový prenos . Všetky tri metódy používajú rovnaké zásady :. Južnej opatrenia DNA , Northern opatrenia RNA , západnej opatrenia bielkoviny